肝がん細胞（HepG2）のアポトーシス誘導（HBx・CEACAM1 の発現調節）

フアイア抽出物である。全文によれば、製造販売企業製のフアイア抽出物 16 g を RPMI1640 培地 1000 mL に溶解し、0.22 μm のフィルターで濾過して用いた。単一成分や多糖を取り出したものではなく、配合製剤でもない。

なお全文では、この原液を 100 mg/mL としているが、16 g/1000 mL からの計算と合わない。濃度の単位も「g/L-1」と誤記されている。

肝がん細胞 HepG2 と、B 型肝炎ウイルスの HBx 遺伝子を安定して発現する HepG2-X 細胞を用いた培養実験のみである。フアイア抽出物 0、1.5、3.0、6.0 g/L を作用させ、増殖を MTT 法、浸潤をマトリゲルでコートしたトランスウェル法、細胞周期をフローサイトメトリー、HBx と CEACAM1 の mRNA と蛋白をリアルタイム PCR とウェスタンブロットで調べた。

全文によれば、処理時間は MTT が 24・48・72 時間、細胞周期とアポトーシス（PI 染色のフローサイトメトリー）が 24 時間、RT-PCR が 48 時間、トランスウェルは前処理後 48 時間である。ウェスタンブロットの処理時間は記載がない。対照は同量の RPMI1640 培地（0 g/L）で、反復は MTT 5 回、トランスウェル 4 回、RT-PCR 3 回である。無作為化・盲検化の記載はない。

フアイア抽出物は時間・濃度に応じて両細胞の増殖を抑えた。浸潤能は対照群と比べ濃度に応じて有意に下がり、細胞周期は S 期で停止し、濃度が上がるにつれて G0/G1 期の割合が下がったと報告されている。各群で HepG2-X 細胞の吸光度（A 値）は HepG2 細胞より高かったとされる。

用いた濃度は 0・1.5・3.0・6.0 g/L で、HBx と CEACAM1 の変化はいずれも濃度依存的（P<0.05）であった。48 時間の増殖抑制率（1.5／3.0／6.0 g/L）は HepG2 で 27.6／49.5／65.1 %、HepG2-X で 16.2／35.1／47.3 % であった。6.0 g/L での浸潤率は対照比 16.09 %（HepG2）、23.46 %（HepG2-X）とされる。

HepG2-X の mRNA（6.0 g/L）は、HBx が 7.25 から 3.56 に下がり、CEACAM1 が 3.25 から 4.23 に上がった。

HBx の発現低下と CEACAM1 の発現上昇である。フアイア抽出物の処理後、HBx の mRNA と蛋白は下がり、CEACAM1 の mRNA と蛋白は濃度に応じて上がったとされる。抄録の冒頭はフアイアが免疫を高めて腫瘍の増殖を抑えると述べているが、本研究は免疫の働きを調べたものではない。

第一に、ヒトでの有効性および安全性。本研究は培養細胞のみを対象としており、肝がんや B 型肝炎の患者を対象とした検証は含まれていない。

第二に、アポトーシスの誘導。表題はアポトーシスの誘導をうたっているが、全文で報告されたアポトーシス率の増加は HepG2 で 6.51 % から 6.92 %、HepG2-X で 5.16 % から 6.84 % と約 1 % にとどまる。

第三に、因果関係と濃度の意味。HBx と CEACAM1 の変化が作用の原因であることは直接確かめられておらず、g/L 単位の培養液中の濃度が体内で得られるかどうかも分からない。

第四に、報告の内部の食い違い。全文の結果本文は G0/G1 期の割合が対照より高いとするが、表 V・VI と抄録では低下している。A 値から再計算した抑制率は報告値と 0.3〜0.6 ポイントずれ、72 時間・1.5 g/L の値は両細胞の表とも 28.3 % で同じである。HBx を導入していない HepG2 にも HBx の発現値が報告されており、表 IV は相対値のため細胞株どうしを比べられない。